Иммуногистохимическое исследование (10 антител)

Проведение комплексного исследования биоптатов при лимфопролиферативных патологиях, которое включает морфологическое описание и оценку экспрессии спектра опухолевых маркеров, для определения адекватной тактики лечения и прогноза.

Лимфомы – онкологические паталогии кроветворной ткани, обозначаемые общим термином « гемобластоз», к ним относятся лейкозы и гематосаркомы. Лимфомы характеризуются формированием разрастающихся очагов новообразований из частиц кроветворной ткани, без поражений костного мозга, лимфатического узла на ранних стадиях. Этиология лимфом до сих пор окончательно не установлена. Риск развития неходжкинских лимфом в основном ассоциируется с инфекционными агентами (вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ), человеческим Т-клеточным лимфотропным вирусом типа I), а также факторами, связанными с внешней средой (пестициды, ионизирующие излучения), аутоиммунными заболеваниями, первичным и вторичным (ятрогенным) иммунодефицитом.

В соответствии с российскими клиническими рекомендациями по диагностированию и лечению лимфопролиферативных болезней (2013), диагноз специалистами устанавливается на основании операционного материала и морфологического исследования биопсийного материала с помощью иммуногистохимическихи гистологических методов. Морфологическое исследование необходимо выполнять при наличии соответствующей классификации патологом-экспертом и полностью соответствовать критериям современной классификации ВОЗ - Всемирной организации здравоохранения. При гистологическом исследовании биоптата объем иммуногистохимического теста определяется исключительно врачом-патологоанатомом. В ряде случаев требуется проводить генетическое и молекулярно-биологическое исследование. При цитологическом исследовании мазков-отпечатков лимфоузла, пунктатов или иных опухолевых очагов не представляет собой достаточное основание для нозологической верификации лимфом.

Трепанобиопсию новообразования и пункционную биопсию с диагностической целью следует выполнять только при необходимости срочного лечения в исключительных случаях.

Дифференциальная диагностика чаще всего встречающихся лимфом с учетом классификации ВОЗ 2008 и клинических российских рекомендаций по диагностированию и терапии лимфопролиферативных заболеваний (2013).

1. Лимфома Ходжкина

Частность заболеваемости в России лимфомой Ходжкина (ЛХ) составляет 2,1 случая в год на 100 тысяч населения. Опасная патология может возникнуть в любом возрасте, но в основном в период 16-35 лет, примечательно что в данную возрастную группу больных больше попадают лица женского пола. Критерии диагноза: все варианты классической ЛХ характеризуются единым иммунофенотипом:

CD30+, CD15+, PAX-5+. В опухолевых клетках может обнаруживаться вирус Эпштейна-Барр (LMP1/EBER).

2. Лимфома из клеток мантии

Лимфома из клеток мантии (ЛКМ) занимает примерно 6% от общего числа лимфатических новообразований. Страдают по большей части пожилые лица мужского пола (медиана патологии – 65-75 лет, соотношение у мужского и женского пола – 3:1). Новообразование морфологически и клинически гетерогенно, в подавляющем большинстве случаев (70-80%) в дебюте определяется генерализованный тип поражения селезенки, ЛУ и экстранодальных областей. Это агрессивная форма лимфомы, общая выживаемость при которой у больных людей составляет около 3-5 лет. Онкологическая патология характеризуется коротким сроком до прогрессирования, сначала первый рецидив - химиорезистентен. Иммунофенотип:

CD20+, CD5+/CD43+, сyclin D1+, BCL-2+, CD3-, CD23- (редкие случаи ЛКМ могут экспрессировать CD10, CD23, BCL-6). Индекс пролиферации - меньше 30%, обычно, ассоциируется с благоприятным ходом болезни, при бластоидной форме способно достигать 80-90%. В тяжелых диагностических случаях будет целесообразно выполнение цитогенетического/FISH-исследования для определения t(11;14). В некоторых случаях при наличии типичной иммуноморфологической и клинической картины отсутствуют t(11;14)(q13;q32) и гиперэкспрессия сyclin D1, присутствует гиперэкспрессия cyclin D2 или cyclin D3. В случаях cyclin D1-негативных лимфом из клеток мантии можно дополнительно применить антитела к p27.

3. Лимфома маргинальной зоны

Лимфомы маргинальной зоны (ЛМЗ) – это группа злокачественных В-клеточных опухолей, которые происходят из В-лимфоцитов, в норме встречающихся в маргинальной зоне селезенки, в фолликулах лимфатических узлов (ЛУ), лимфатических тканей. Выделяют три типа ЛМЗ:

• нодальную лимфому;
• лимфому селезенки;
• экстранодальную MALT (Mucosa-Associated Lymphoid Tissue – мукозоассоциированную) лимфому.

Зачастую при экстранодальных MALT-лимфомах происходит поражение желудочно-кишечного тракта (около 50% случаев). Среди органов, входящих в ЖКТ на долю MALT-лимфомы желудка приходится приблизительно 80% случаев. Имеется доказанная связь между инфицированностью Helicobacter pylori и MALT-лимфомой желудка, Chlamydophila psittaci и ЛМЗ орбиты, Borrelia burgdorferi и ЛМЗ кожи, Campylobacter jejuni и IPSID (Immunoproliferative Small Intestine Disease – иммунопролиферативной болезнью заболеванием тонкой кишки), ЛМЗ селезенки и вирусом гепатита С и негастральными MALT-лимфомами. Иммунофенотип: иммунофенотип нодальных и экстранодальных В-клеточных лимфом из клеток маргинальной зоны идентичен: CD20+, CD5-, CD10-, CD23-, BCL-2+/-, BCL-6-, MUM 1+. В тяжелых случаях при преобладании диффузного роста рекомендуется дополнительное исследование экспрессии CD38(-) и CD44(+).

4. Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома

ДВКЛ - диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома - наиболее распространенный тип лимфом у взрослых - составляет 30% от всех неходжкинских лимфом. Частотность заболеваемости равняется приблизительно 4-5 случаев на 100 тысяч человек в год. Вероятность формирования и развития патологии растет с возрастом (медиана заболеваемости – 63 года). Стоит отметить, что женщины и мужчины страдают данной болезнью почти с одинаковой частотой. Иммунофенотип: экспрессия пан-В-клеточных антигенов CD20+, CD79a+, PAX 5+, CD45+, CD3-. ДВКЛ, обычно, характеризуется повышенной пролиферативной и митотической активностью. Ki-67 экспрессируется в расширенном диапазоне: от 40 до 90%, в ряде наблюдений превышает 90%. Наличие технических возможностей в алгоритме диагностирования позволяет включиться генетическому исследованию с выявлением наличия перестройки генов MYC (до 10% случаев), BCL-6 (до 30% случаев), t(14;18)(q32;q21).

5. Фолликулярная лимфома

Фолликулярная лимфома (ФЛ) – второе по частотности заболевание среди всех злокачественных лимфопролиферативных патологий взрослых. Данный показатель существенно варьирует в различных географических зонах и во многом зависит от расовой, этнической принадлежности лиц, у которых выявлено данное заболевание. Возрастная медиана у пациентов составляет 60 лет, соотношение мужчин и женщин приблизительно 1:1,7. Иммунофенотип: В-клеточная лимфома с иммунофенотипом CD20+, CD10+/-, BCL-2+, BCL-6+, CD3-, CD5-, CD23+/-, CD43-, сyclin D1-. В редких случаях ФЛ может быть BCL-2-негативная. В такой ситуации рекомендуется цитогенетическое исследование для определения t(14;18) или реаранжировки BCL-2. Пролиферативный индекс обычно не превышает 20%, Ki-67 > 30% ассоциируется с наименее благоприятным прогнозом.

6. Нодальные Т-клеточные лимфомы

Редкая группа заболеваний, для которых характерна патобиологическая гетерогенность, составляет приблизительно 15% от всех видов лимфом. При этом, вне зависимости от особенностей своего формирования, развития и течения (не считая редких исключений), это агрессивные формы лимфом с крайне неблагоприятным прогнозом. Самые распространенные формы: - периферическая Т-клеточная лимфома.

Иммунофенотип: CD2+, CD3+, CD4+, CD5+, CD7+, CD8+, с признаками аберрантности иммунофенотипа (утратой некоторых из них), определенная часть клеток может экспрессировать CD30. - ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома. Иммунофенотип: опухолевые клетки экспрессируют пан-Т-клеточные маркеры, CD4+ преобладают над CD8+. Вероятна утрата какого-либо из пан-Т-клеточных антигенов как проявление аберрантного фенотипа.

Вариабельное количество опухолевых Т-клеток экспрессирует CD10, BCL6. Самым специфичным, но не таким чувствительным маркером для этого варианта лимфомы является присутствие антител к CXCL13. - крупноклеточная анапластическая лимфома (АККЛ). Иммунофенотип: ключевым иммунофенотипическим признаком является экспрессия CD30 и полиморфная/анаплазированная морфология.

Опухолевые клетки обладают аберрантным фенотипом с утратой некоторых Т-клеточных антигенов. В ряде случаев невозможно доказать Т-клеточный иммунофенотип (так называемые 0-клеточные АККЛ). Часто выявляется экспрессия цитотоксических молекул (TIA-1, granzyme В, perforin). Экспрессия CD45 и EMA вариабельна.

7. Хронический лимфолейкоз

Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) – относится к числу самых частых видов лейкозов у взрослых. Частотность в европейских государствах составляет 4:100 тысяч населения в год и напрямую связана именно с возрастом. У пожилых лиц старше 80 лет частотность равняется более 30:100 тысяч человек (в год). Возрастная медиана на момент диагностирования в странах Европы – 69 лет. В России хронический лимфолейкоз устанавливается реже и возрастная медиана на момент установки диагноза ниже, то есть соразмерно более низкой продолжительности жизни россиян. Иммунофенотип: ХЛЛ характеризуется гетерогенной экспрессией CD20, коэкспрессией CD5, CD23, CD43.

Материал для исследования: биоптат опухоли, фиксированный в забуференном 10% растворе формалина.

Особые условия подготовки определяются лечащим врачом. Что касается иных требований, то необходимо придерживаться простых правил:

• пациент должен находиться в состоянии полного покоя 30 минут;
• следует отказаться от курения и употребления алкогольных напитков.

При приеме каких-бы ни было лекарственных препаратов, есть смысл проконсультироваться с лечащим врачом о целесообразности проведения тестов или правильно подойти к вопросу отмены применяемого средства.

С целью диагностирования лимфопролиферативных заболеваний.

Важно понимать, что интерпретация данных исследований является прерогативой лечащего врача. Категорически нельзя использовать полученную информацию для самодиагностики и самостоятельного лечения. Специалист ставит точный диагноз, основываясь как на данные теста, так и за счет сбора информации от пациента, пользуясь другими источниками, исследованиями, анамнезом и т. д.

Референсные значения.

Спектр значений строго индивидуален, имеет значение фаза менструального цикла, установленного клинического диагноза, собранного анамнеза и уже проведенного лечения.

1. Макроскопическая интерпретация присланного для исследования материала. При изучении микропрепаратов и готовых блоков в протоколе указываются идентификационные номера и численность всех изучаемых объектов.
2. Гистологическое описание лимфомы, в котором указывается тип роста (диффузный, фолликулярный, нодулярный и т. п.), характерное описание клеточного состава (мелкие, полиморфный состав, крупные клетки, анапластическая, наличие многоядерных форм, бластная морфология, характеристика ядер), присутствие резидуальных и реактивных компонентов.
3. Ответы иммуногистохимического исследования, в котором указываются использованные антитела, их клоны, подробности окрашивания, указывающие на специфический реактивный характер.
4. Диагностический вывод, который сформулирован согласно с действующей классификацией Всемирной организации здравоохранения.