ПЦР-диагностика

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это высокоточный метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал (ДНК или РНК) инфекционных агентов в биологических образцах. Благодаря амплификации (многократному копированию) специфических фрагментов нуклеиновой кислоты, метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что делает его «золотым стандартом» в диагностике инфекционных заболеваний.

ПЦР-диагностика применяется для выявления вирусных, бактериальных и грибковых инфекций, в том числе на доклинических стадиях, когда другие методы могут быть недостаточно информативны. Методика широко используется в диагностике инфекций, передающихся половым путем (ИППП), вирусных гепатитов, туберкулеза, COVID-19, респираторных и кишечных инфекций.

В основе метода лежит несколько ключевых этапов: выделение и очистка ДНК или РНК, амплификация в специальных термоциклах и детекция результатов. В современных лабораториях используются как классическая ПЦР, так и ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR), которая позволяет не только обнаруживать инфекционные агенты, но и количественно оценивать их концентрацию.

Сферы применения ПЦР-диагностики

• Диагностика вирусных (гепатиты A, B, C, D, G, ВИЧ, герпес, ВПЧ), бактериальных (туберкулез, листериоз, хеликобактерная инфекция, гонорея, сифилис), грибковых и паразитарных инфекций (кандидоз, трихомониаз, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз).
• Выявление возбудителей инфекций, передающихся половым путем, диагностика воспалительных заболеваний органов малого таза.
• Обнаружение мутаций в генах, ассоциированных с наследственными и онкологическими заболеваниями.
• Диагностика наследственных заболеваний, определение носительства мутаций, установление родства и отцовства.
• Идентификация патогенов в воде, пище и окружающей среде для предотвращения вспышек инфекционных заболеваний.

Правила сбора и транспортировки биоматериала

Для ПЦР-анализа могут использоваться различные биологические материалы:

• кровь;
• слюна;
• моча;
• сперма;
• мокрота;
• кал;
• спинномозговая жидкость;
• эпителиальные соскобы;
• биоптаты.

Правильный забор и транспортировка образцов критически важны для точности исследования.

Забор материала проводится в условиях процедурного кабинета с соблюдением стерильности. Используются одноразовые инструменты и контейнеры.

• Кровь берется утром натощак с помощью вакуумных пробирок с антикоагулянтом.
• Моча – используется первая утренняя порция.
• Соскобы и мазки – за 72 часа до исследования исключаются половые контакты, нельзя использовать антисептические средства, не рекомендуется мочиться за 3 часа до процедуры.
• Слюна – перед сдачей рот полощут физиологическим раствором, исключается прием пищи минимум за 30 минут.
• Образцы должны быть доставлены в лабораторию как можно быстрее. При необходимости временного хранения они должны находиться при температуре +4°С…+8°С. Некоторые образцы допускают заморозку.

Источники:

1. Малиновская В.В., Козлова Е.В. Полимеразная цепная реакция в диагностике инфекционных заболеваний. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2019.
2. Куликов С.М., Лебедева Н.В. Методы молекулярной биологии: ПЦР и её модификации. – СПб.: Наука, 2020.